
在生命科学研究、疾病诊断、法医学鉴定等众多领域,核酸(DNA和RNA)作为遗传信息的载体,对其进行高效、精准的提取是开展后续研究与检测的基础。核酸提取仪作为自动化提取核酸的关键设备,凭借先进的技术原理,大幅提升了核酸提取的效率与质量。下面,我们将深入探究核酸提取仪的工作原理。
核酸提取的基本原理
核酸广泛存在于细胞内,与蛋白质、多糖等生物大分子共存,核酸提取的核心在于将核酸从复杂的生物样本中分离纯化出来。不同类型的核酸提取方法基于不同的原理,主要包括吸附法、磁珠法、沉淀法等,而核酸提取仪便是基于这些原理,通过自动化操作实现核酸的高效提取。
核酸提取仪的工作原理与技术类型
(一)吸附柱法核酸提取仪
吸附柱法的原理是利用硅胶膜等吸附材料对核酸的特异性吸附能力。在高盐、低pH值的条件下,核酸能够特异性吸附在硅胶膜表面,而蛋白质、多糖等杂质则不被吸附或被冲洗掉。当条件变为低盐、高pH值时,核酸又会从硅胶膜上洗脱下来,从而实现核酸的分离纯化。
吸附柱法核酸提取仪通过机械臂或液体处理系统,自动完成样本裂解、核酸结合、洗涤、洗脱等一系列操作。仪器先将样本加入含有裂解液的反应管中,裂解液中的成分(如蛋白酶K、表面活性剂等)能够破坏细胞结构,释放出核酸。接着,仪器将含有核酸的裂解液转移至装有吸附柱的离心管中,通过离心或负压抽滤等方式,使核酸吸附到吸附柱的硅胶膜上。随后,仪器依次加入不同的洗涤液,去除吸附柱上残留的杂质。最后,加入洗脱液,在适宜的条件下将核酸从吸附柱上洗脱下来,收集得到纯化的核酸。该方法具有成本较低、适用样本类型广泛等优点,但操作过程中需要使用离心或抽滤装置,且提取通量相对有限。
(二)磁珠法核酸提取仪
磁珠法是目前应用较为广泛的核酸提取技术,其原理基于超顺磁性纳米磁珠表面修饰的特定官能团与核酸分子之间的相互作用。磁珠表面的官能团(如硅羟基、羧基等)在特定的缓冲液条件下,能够与核酸分子通过氢键、静电作用等方式特异性结合,而杂质则不与磁珠结合。当外部施加磁场时,磁珠会聚集在磁场方向,从而实现磁珠-核酸复合物与杂质的分离;去除磁场后,磁珠又会重新分散在溶液中。
磁珠法核酸提取仪的工作流程如下:首先,将样本与裂解液混合,裂解细胞释放核酸。然后,加入磁珠,在一定条件下使磁珠与核酸充分结合。接着,仪器通过内置的磁体产生磁场,将结合了核酸的磁珠吸附到反应管壁上,仪器自动吸弃上清液,去除杂质。之后,依次加入洗涤液,在磁场作用下对磁珠进行洗涤,进一步去除残留杂质。最后,加入洗脱液,在适宜条件下使核酸从磁珠上解离,仪器移除磁场,收集含有核酸的洗脱液,完成核酸提取。磁珠法具有自动化程度高、提取效率快、可实现高通量提取等优势,适用于大量样本的快速处理,在临床诊断和科研领域应用广泛。
(三)沉淀法核酸提取仪
沉淀法基于核酸在某些特定溶液(如乙醇、异丙醇等有机溶剂)中的溶解性差异。在高浓度盐溶液和有机溶剂存在的条件下,核酸会从溶液中沉淀出来,而蛋白质等杂质则留在溶液中。通过离心等方式,可将沉淀的核酸与溶液分离,再经过洗涤、干燥等步骤,去除残留的杂质和有机溶剂,最终得到纯化的核酸。
沉淀法核酸提取仪通过自动化的液体处理系统,精确控制溶液的添加和混合,以及离心操作。仪器先将样本与裂解液混合,裂解细胞释放核酸,然后加入适量的盐溶液和有机溶剂,使核酸沉淀。接着,仪器进行离心操作,将核酸沉淀收集到离心管底部,吸弃上清液。之后,加入洗涤液对核酸沉淀进行洗涤,再次离心后去除洗涤液。最后,通过干燥或挥发的方式去除残留的有机溶剂,加入适量的缓冲液溶解核酸,完成提取过程。沉淀法成本相对较低,但操作步骤较为繁琐,且提取过程中可能会因机械力等因素导致核酸断裂,影响核酸质量。
核酸提取仪的自动化与智能化
现代核酸提取仪通常配备了精密的控制系统和传感器,能够实现自动化操作和实时监控。仪器可以根据预设的程序,自动完成样本加载、试剂添加、混合、分离、洗涤、洗脱等一系列步骤,减少了人工操作的误差和时间成本。同时,仪器内置的传感器能够实时监测反应温度、液体体积、磁珠状态等参数,确保提取过程在最佳条件下进行。部分高端核酸提取仪还具备智能化功能,如自动识别样本类型、自动优化提取程序等,进一步提高了核酸提取的效率和质量。
核酸提取仪通过基于吸附柱法、磁珠法、沉淀法等不同原理的技术,结合自动化与智能化的设计,实现了核酸的高效、精准提取。不同类型的核酸提取仪各有优势和适用场景,科研人员和检测人员可根据实际需求选择合适的仪器,为后续的核酸检测与研究提供高质量的样本基础,推动生命科学和医学领域的不断发展。
文章来源:http://www.boqinglab.com
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